课程内容

《微生物的实验室培养》
（一）培养基
阅读教材P14-P15相关内容，回答以下问题：
1、何为培养基？
2、按照培养基物理形态，培养基有哪些种类？
液体培养基：表面生长、均匀混浊生长、沉淀生长
固体培养基：菌落，菌苔
菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
菌落是鉴定菌种的重要依据。
菌落：细菌的菌落特征因种类而异
3、不同的培养基有不同的配方，但是其基本成分都相同，都包括哪些营养元素？有何作用？请举例说明。（教材P15）
（二）无菌技术
4、何为无菌技术？无菌技术包括哪些方面？
5、什么是消毒？灭菌？两者有何区别？
6、常见的消毒与灭菌的方法有哪些？有何要求？
7、请说出干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的操作步骤。
1、概念
无菌技术又称无菌操作，泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。
2、消毒和灭菌
1）消毒：使用温和的物力或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物。（不包括芽孢和孢子）
2）灭菌：使用强烈的物理或化学方法杀死物体内外所有的微生物。（包括芽孢和孢子）
3）防腐：防止或抑制微生物生长繁殖的方法。
3、常用的消毒与灭菌的方法
（1）消毒的方法
①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min
②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min
③化学药剂消毒法：用75%酒精进行皮肤消毒；用氯气消毒水源等
④紫外线消毒
（2）灭菌的方法
①灼烧灭菌
②干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。
③高压蒸汽灭菌：100kPa、121℃下维持15~30min。
实验操作——大肠杆菌的纯化培养
（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
计算——称量——溶化——调PH值——灭菌——倒平板（冷却至50℃）
（二）纯化大肠杆菌
1、平板划线接种
1、操作开始时灼烧接种环：
避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；
每次划线前灼烧接种环：
杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。
划线结束后灼烧接种环：
及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
2、在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却再进行划线？
以免接种温度太高，杀死菌种。
3、在作第二次及其后的划线操作使，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落
2、稀释涂布平板法
菌种的保存
1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。
2、长期保存：甘油冷冻管藏法